Preparação dos meios de cultura: objetivos e etapas

A preparação dos meios de cultura é uma metodologia de rotina usada em laboratórios para o crescimento dos microrganismos desejados. Os meios de cultura são preparações sólidas, líquidas ou semi-sólidas que possuem todos os nutrientes necessários para o desenvolvimento de uma população microbiana.

Em geral, os meios para cultivar microorganismos são ricos em proteínas e aminoácidos e geralmente contêm algum componente que favorece o crescimento do organismo que você deseja estudar, como vitaminas, sangue, soro, entre outros.

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Fonte: pixabay.com

Não existe meio de cultura geral ou universal, pois sua composição varia de acordo com as necessidades do microrganismo de interesse. Algumas bactérias podem se desenvolver em qualquer meio de cultura, mas outras têm requisitos especiais.

Em que consiste?

Microrganismos, como fungos e bactérias, não podem ser estudados individualmente devido ao seu pequeno tamanho. Portanto, eles devem ser cultivados em meios artificiais que permitam um aumento significativo da população.

Por exemplo, se queremos estudar bactérias, precisamos fornecer as condições adequadas para que elas possam proliferar e formar uma colônia (o que pode ser observado a olho nu).

A preparação dos meios de cultura varia amplamente, dependendo do tipo de microrganismo a ser cultivado. Antes de prepará-lo, é necessário conhecer as necessidades nutricionais básicas do corpo de trabalho.

Os componentes mais comuns usados ​​nos meios de cultura serão descritos abaixo para ter uma idéia geral de sua preparação:

Ágar

É usado em culturas como um agente gelificante e é adicionado quando um meio sólido ou semi-sólido é procurado. O primeiro agente solidificador usado na preparação dos meios foi a gelatina, mas em 1883 o ágar foi introduzido no mundo da bacteriologia por W. Hesse.

O agar do tipo bacteriológico tem como componente principal um polissacarídeo complexo ramificado, extraído de algas. Este composto é usado como espessante para alimentos comuns, como sorvetes e geléias.

É um elemento muito valioso em microbiologia por várias razões. Principalmente porque os microrganismos não podem degradá-lo, liquefaz a uma temperatura de 100 ° C e permanece em estado líquido até atingir cerca de 45 ° C ou menos.

Caso você deseje preparar um meio sólido, a concentração de ágar deve ser de cerca de 1,5%, enquanto os semi-sólidos devem ser preparados de 0,3 a 0,5%.

Fluidos

O cultivo de organismos patogênicos precisa de fluidos corporais para que eles possam se desenvolver como se fossem em seu ambiente natural. Por esse motivo, é adicionado sangue total ou desfibrilado. O fluido é extraído de um animal saudável e, uma vez esterilizado, é adicionado ao meio de cultura.

Trechos

São obtidos de diferentes partes do animal (como carne ou fígado) ou vegetais (sementes) e processados ​​para obter um concentrado sólido na forma de pasta ou pó. Os mais comuns são leveduras, malte e carne.

Peptonas

Estes compostos orgânicos são obtidos por hidrólise enzimática ou química de tecidos animais ou vegetais. O objetivo é adicionar conteúdo rico em aminoácidos, que são as unidades fundamentais das proteínas.

Amortecedores

Os buffers ou sistemas de buffer evitam mudanças bruscas de pH e ajudam a manter a faixa ideal que o corpo tolera.

A maioria dos organismos pode se desenvolver adequadamente a um pH de 7, embora algumas bactérias prefiram meios alcalinos. No entanto, existem bactérias que resistem às variações de pH entre os valores de 6 e 9.

Em espécies sensíveis ao pH, o dano não é causado pela quantidade excessiva de íons hidrogênio ou hidroxila, mas pelo aumento de ácidos ou bases fracos que podem penetrar na célula.

Da mesma forma, são adicionados indicadores de que o pH é capaz de monitorá-lo e evitar desvios causados ​​pela fermentação ou outros processos.

Objetivos

O principal objetivo ao preparar um meio de cultura é adicionar todos os componentes necessários para permitir o desenvolvimento bem-sucedido do organismo que deseja ser isolado. A combinação mais eficaz de componentes e nutrientes deve ser identificada para alcançar o ambiente desejado.

Tanto a preparação quanto o armazenamento do meio são críticos para garantir um crescimento bem-sucedido, pois a composição do meio e a disponibilidade de nutrientes dependem dessas etapas.

Deve-se levar em consideração que o cultivo de microrganismos é uma tarefa afetada por vários fatores externos ao meio de cultura, como intensidade da luz recebida, temperatura e nível de acidez ou alcalinidade do meio. Portanto, cada uma dessas variáveis ​​deve ser levada em consideração.

Tipos de mídia

Com base em sua composição

Com base em sua composição, existem três tipos principais de culturas: meios naturais ou empíricos, semi-sintéticos e sintéticos ou químicos definidos.

Médio natural

Na mídia natural, a composição exata é desconhecida. Estes incluem ingredientes como leite, sangue diluído, sucos vegetais, extratos e infusões de carnes e peptonas. Por razões econômicas, geralmente são adicionados componentes de baixo custo, como extrato de soja, soro de leite, melaço etc.

Meios semi-sintéticos

É chamado meio semi-sintético se sua composição é parcialmente conhecida. Qualquer meio contendo ágar se torna um meio semi-sintético.

Entre eles, temos agar de dextrose de batata, ágar czapek-dox, ágar de aveia, ágar peptona de carne, entre outros exemplos.

Meios sintéticos ou químicos definidos

Nesse caso, a composição do meio – em termos da quantidade de fontes de carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo e qualquer outro fator de crescimento necessário – é totalmente conhecida. É muito útil se você deseja obter resultados reproduzíveis para outros pesquisadores.

Para os chamados “microorganismos com requisitos especiais de crescimento”, é necessário adicionar os componentes necessários. Um exemplo desse tipo é o Lactobacillus .

Com base no tipo de microrganismo

Da mesma forma, existe outra classificação para os meios de cultura com base no tipo de microrganismo que pode crescer nele. Seguindo esse princípio, temos os seguintes meios gerais de enriquecimento, seletivo e diferencial. Cada um é descrito abaixo:

Meios gerais

Estes apoiam o desenvolvimento de uma grande variedade de microorganismos. Se um organismo precisa de condições especiais para seu crescimento, ele não pode se desenvolver com sucesso nesse tipo de colheita.

Meios de enriquecimento

Os meios de enriquecimento favorecem o crescimento de um certo tipo de microorganismo, mas nenhuma substância foi adicionada para impedir que outros tipos de micróbios cresçam nele.

Mídia seletiva

Eles buscam o crescimento específico de um microorganismo, denominam fungos, bactérias, protozoários, entre outros. Para fazer isso, eles inibem o desenvolvimento de outros.

Para atingir esse objetivo, compostos químicos mortais podem ser adicionados a um grande grupo de microorganismos e inofensivos ao organismo de interesse ou adicionando fontes de energia que são assimiláveis ​​apenas pelo micróbio procurado.

Meios seletivos são usados ​​quando amostras médicas são coletadas para cultivar algum microorganismo patogênico. Aqui é necessário favorecer o crescimento do patógeno e inibir o desenvolvimento da flora microbiana normal do paciente.

O ágar sulfito de bismuto, por exemplo, não permite o crescimento de bactérias gram-positivas e um grande número de bactérias encontradas na cavidade gastrointestinal. Portanto, a bactéria gram-negativa que causa febre tifóide, Salmonella typhi , é usada em amostras fecais.

Meios diferenciais

Esse tipo utiliza alguma característica diagnóstica do organismo de interesse (peculiaridades em seu metabolismo, por exemplo) para identificá-lo contra outra espécie que cresce no mesmo ambiente.

Os meios diferenciais e seletivos são muito úteis na área de microbiologia clínica e saúde pública, pois essas disciplinas precisam detectar a presença de microrganismos específicos relacionados a patologias ou más condições de higiene.

Substâncias indicadoras podem ser adicionadas à cultura, dando uma característica distintiva à colônia procurada. Por exemplo, lactose e um indicador de pH são adicionados ao meio azul de agar-eosina-metileno (EMB abreviado) e o ágar-MacConkey.

Assim, quando uma colônia se desenvolve nesses meios com a capacidade de fermentar lactose e produzir aldeídos, eles podem ser observados em uma cor especial.

Passos

Atualmente, o meio de cultura pode ser adquirido na forma liofilizada. Portanto, a preparação é facilitada e apenas o produto permanece reidratado. O conteúdo deve ser pesado (levando em consideração a quantidade final a ser preparada) e dissolvido em água destilada, seguindo todas as indicações do produto.

O conteúdo do meio líquido deve ser dividido nos recipientes desejados (placas de Petri, tubos, etc.) para posterior esterilização. Para distribuir o meio sólido, é necessário derreter usando um micro-ondas ou submetendo o material a um banho de água. O pH do meio deve ser ajustado.

Normalmente, o ágar é usado em tubos de ensaio ou em placas de Petri. Se o ágar solidificar em uma posição inclinada, com o ângulo apropriado para que a borda final do terminal seja diagonal, esse arranjo é conhecido como tubos de canal ou canal de canal inclinado. Quando o ágar solidifica em uma posição completamente vertical, é chamado de “profundo”.

Depois de esterilizar a mídia – usando uma autoclave – eles podem esfriar. Estes devem ser manuseados em um ambiente livre de microrganismos; o mais comum é trabalhar com um isqueiro que garanta um ambiente asséptico nas proximidades.

Referências

  1. Celis, JE (2006). Biologia celular: um manual de laboratório (Vol. 2). Elsevier
  2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM e Scott, EG (1991). Bailey Scott: diagnóstico microbiológico . Médico pan-americano.
  3. Olivas, E. (2004). Manual de Práticas de Microbiologia I e II e Parasitologia . Universidade Autônoma de Ciudad Juárez.
  4. Schlegel, HG e Zaborosch, C. (1993). General Microbiology . Cambridge University Press.
  5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Introdução à microbiologia . Pan-American Medical Ed.

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