Safranina: características, uso, técnicas, toxicidade

A safranina é um corante meriquinóide, nomeado por possuir em sua estrutura química 2 anéis benzenoides e 2 anéis quinoides, sendo estes últimos os que dão a cor vermelha.

É também chamado de dimetil safranina ou vermelho básico 2 em sua forma de resumo, uma vez que seu nome científico é 3,7-diamino-2,8-dimetil-5- fenil-fenazínio-cloro-dimetil-safranina e a fórmula química é C 20 H 19 N 4 Cl.

Safranina: características, uso, técnicas, toxicidade 1

Estrutura química da safranina indicando anéis benzenoides e quinoides / solução aquosa de safranina. Fonte: NEUROtiker [Domínio público] editado por MSc. Marielsa Gil / LHcheM [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Existe uma variante chamada trimetil-safranina, mas não há diferença significativa entre as duas substâncias.

A safranina é um corante monocromático e, de acordo com as características da fórmula química, é uma substância com carga positiva. Portanto, tem uma afinidade com estruturas carregadas negativamente. Essas estruturas serão tingidas de vermelho.

Essa propriedade fornece aplicabilidade em muitas técnicas histológicas para colorir várias estruturas celulares, organismos eucarióticos e procarióticos.

A safranina é usada como corante de contraste em técnicas importantes e conhecidas para uso rotineiro em bacteriologia. Essas técnicas são: coloração de Gram-Hucker, coloração de Schaeffer Fulton para esporos ou coloração de cápsula bacteriana, entre outras.

Caracteristicas

A cor do açafrão (especiaria obtida dos estigmas da flor Crocus sativus ) foi a inspiração para nomear esse corante. O termo açafrão vem do nome safranine. Isso se deve à grande semelhança entre a cor do açafrão e a cor que esse corante fornece.

A safranina é obtida na forma de cristais ou pó, sendo ambas as apresentações solúveis em água. O corante de safranina não tem cheiro. Mancha as estruturas de vermelho. As estruturas que atraem corantes de safranina são chamadas safranófilos.

Estruturalmente, a safranina é complexa, possui dois anéis benzenoides nas extremidades e os dois anéis quinoides onde o cátion N + está localizado no centro . O centro da estrutura é o sistema responsável por fornecer cores.Por essa característica, esse corante é classificado na categoria II.

Use

A safranina é usada para tingir várias estruturas. Destaca especialmente as células de Kulchitsky presentes no trato gastrointestinal, também chamadas células enterocromafinas.

É capaz de manchar microrganismos pertencentes à família Rickettsiaceae . Da mesma forma, é usado em várias técnicas, como o método Koster, um modificado usado para colorir bactérias do gênero Brucella .

Por outro lado, a safranina é usada na técnica de coloração de esporos de Schaeffer Fulton e na coloração de Gram-Hucker. Nas duas técnicas, a safranina funciona como um corante de contraste.

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No primeiro, os esporos assumem a cor verde malaquita e o restante das estruturas são vermelhas pela safranina. No segundo, as bactérias Gram-negativas perdem a cor do cristal violeta na etapa de branqueamento; portanto, a safranina é a que mancha as bactérias Gram-negativas de vermelho.

Além disso, a safranina é usada em bacteriologia para preparar o meio de agar Brucella com uma diluição de safranina 1: 5000. Este meio serve para diferenciar as espécies de Brucella suis do resto das espécies. Brucella melitensis e Brucella abortus crescem neste meio, mas B. suis é inibido.

No campo agroindustrial, a safranina tem sido usada a 2,25% e diluída em 1:10 para tingir amostras de caule da planta de cana-de-açúcar.

Esta planta é comumente afetada pela bactéria Leifsonia xyli subsp.xyli , que danifica o xilema da planta. As hastes tingidas são avaliadas para determinar a função dos vasos do xilema.

Técnicas na área de bacteriologia

Mancha de Castañeda para coloração de rickettsias

Um esfregaço de sangue ou tecido é colocado em uma solução tampão (tampão fosfato pH 7,6). Deixe secar espontaneamente e depois cubra com azul de metileno por 3 minutos e neutralize com safranina.As riquétsias são de cor azul, contrastando com o fundo vermelho.

Mancha Koster modificada para Brucella

Uma mancha é feita e inflamada no isqueiro para fixação. Em seguida, cubra com uma mistura de 2 partes de safranina aquosa saturada com 3 partes de solução de KOH a 1 mol / L, por 1 minuto. A lavagem é feita com água destilada e é manchada com azul de metileno vedado a 1%.

Se a amostra contiver bactérias do gênero Brucella, elas serão observadas em laranja sobre fundo azul.

Coloração de cápsulas bacterianas

Uma mistura de suspensão bacteriana é feita com tinta chinesa e a safranina é adicionada. Sob o microscópio, um halo avermelhado será observado em torno de cada cápsula bacteriana com fundo preto.

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Coloração de esporos de Schaeffer Fulton

Uma extensão é realizada com a suspensão bacteriana. Então é fixado ao calor. É coberto com 5% de verde malaquita, frequentemente incendiando até a emissão de vapores. O processo é repetido por 6 a 10 minutos. Finalmente, lave com água e neutralize com safranina a 0,5% por 30 segundos.Os bacilos ficam vermelhos e os esporos esverdeados.

Mancha de Gram-Hucker

Uma suspensão bacteriana prolongada é realizada e fixada ao calor. A folha é coberta com cristal violeta por 1 minuto. Em seguida, o lugol é colocado como uma solução mordente por 1 minuto. Posteriormente, é descolorido com álcool acetona e, por fim, é manchado com safranina por 30 segundos.

As bactérias Gram-positivas mancham a violeta azul e as bactérias Gram-negativas vermelhas.

Alguns laboratórios pararam de usar a técnica de Gram-Hucker para adotar a técnica de Gram-Kopeloff modificada. Neste último, a safranina é substituída pela fucsina básica. Isso ocorre porque a safranina mancha levemente a espécies dos gêneros Legionella , Campylobacter e Brucella .

Técnicas na área de histologia

Coloração celular de Kulchitsky (enterocromafinas)

As seções de tecido do trato gastrointestinal são coradas com cloreto de prata. É então descolorado com tiossulfato de sódio e, finalmente, contra-corado com safranina.

As células de Kulchitsky se distinguem porque são apresentadas com grânulos marrom-escuro.

Coloração para detecção de osteoartrite

Como a safranina possui uma carga positiva, ela se liga muito bem aos grupos carboxílico e sulfato dos glicosaminoglicanos. Estes fazem parte dos proteoglicanos que constituem a cartilagem articular. Nesse sentido, ao colorir com safranina O, é possível identificar se há ou não perda de cartilagem.

A perda de tecido cartilaginoso pode ser medida através da escala de Mankin ou também chamada de escala de osteoartrite.

A técnica é explicada abaixo: a seção histológica é imersa em uma bandeja com solução de hematoxilina férrica de Weigert, depois passada por álcool ácido e lavada com água.

Continue o processo de coloração mergulhando a folha em verde rápido, lavando com ácido acético e agora imerso em safranina O. Para finalizar o processo, desidrate usando álcoois em diferentes concentrações em ordem crescente. O último passo requer xileno ou xilol para a amostra esclarecer.

As folhas são condicionadas com bálsamo canadense ou similar a ser observado ao microscópio.

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Com essa técnica, os núcleos são manchados de preto, o osso verde e a cartilagem, onde os proteoglicanos são vermelhos.

Coloração para identificação de macroalgas

Pérez et al em 2003 propuseram uma técnica simples e econômica para tingir macroalgas. As amostras são preparadas em cortes histológicos com parafina. Os cortes são fixados com glicerina a 1%, permitindo que seque completamente. Em seguida, é colocado em xilol para remover a parafina.

O corte é reidratado, passando por uma série de bandejas contendo etanol em diferentes graus de concentração (ordem descendente), por 2 min cada.

Posteriormente, corar por 5 minutos com uma mistura 3: 1 de safranina a 1% com azul de toluidina a 1%, ambos preparados com 50% de etanol. Três gotas de ácido pícrico que atua como mordente são adicionadas à mistura.

Então ele se desidrata passando pelas bandejas de álcool novamente, mas desta vez em ordem crescente. Finalmente, lave com xilol e prepare a amostra com bálsamo canadense a ser observado.

Toxicidade

Felizmente, a safranina é um corante que não representa um perigo para quem o manuseia. É um corante inofensivo, não é cancerígeno e não é inflamável.

O contato direto com a pele ou mucosas pode causar um ligeiro avermelhamento da área, sem grandes complicações. Para isso, é recomendável lavar a área afetada com água em abundância.

Referências

  1. García H. Colorant safranina O. Técnico de Saúde , 2012; 1 (2): 83-85. Disponível em: medigraphic.com
  2. Mancha de Gil M. Gram: fundação, materiais, técnica e usos. 2019. Disponível em: lifeder.com
  3. Esporos de Gil M. Spore: fundamento, técnicas e usos. 2019. Disponível em: lifeder.com
  4. Safranina. » Wikipedia, A enciclopédia livre . 7 de março de 2017 às 10:39 UTC. 3 de agosto de 2019 às 20:49 pt.wikipedia.org
  5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Técnica de coloração útil na interpretação anatômica de Gracilariopsis tenuifrons e Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Minutos Bot. Venez . 2003; 26 (2): 237-244. Disponível em: scielo.org.
  6. Igreja Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relação da funcionalidade dos vasos do xilema e a presença de Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Proteção Vegetal 2007; 22 (1): 65-65. Disponível em: scielo.sld

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