Sal e ágar manitol são meios de cultura amplamente utilizados em microbiologia para o cultivo e identificação de microorganismos. O sal inibe o crescimento de bactérias não halófilas, enquanto o ágar manitol serve como fonte de carbono para o crescimento de bactérias fermentadoras de manitol. Neste artigo, discutiremos a fundação, preparação e os principais usos desses meios de cultura na microbiologia.
Função do ágar sal manitol na identificação de bactérias patogênicas.
A função do ágar sal manitol na identificação de bactérias patogênicas está relacionada à capacidade desse meio de cultura em diferenciar bactérias que são capazes de fermentar o manitol daquelas que não possuem essa capacidade. O ágar sal manitol é composto por ágar, sal (NaCl) e manitol, sendo um meio seletivo e diferencial utilizado principalmente na identificação de Staphylococcus aureus.
Quando as bactérias fermentam o manitol presente no meio, ocorre a produção de ácido lático, o que resulta na diminuição do pH do meio e alteração da cor do indicador fenol vermelho para amarelo. Dessa forma, as bactérias que fermentam o manitol são capazes de crescer no ágar sal manitol e formar colônias amarelas, enquanto as bactérias que não fermentam o manitol não conseguem crescer nesse meio.
Assim, o ágar sal manitol é uma ferramenta importante na identificação de Staphylococcus aureus, que é uma bactéria patogênica comum em infecções de pele e outras doenças. A capacidade de fermentar o manitol é uma característica chave dessa bactéria, e a utilização do ágar sal manitol permite diferenciá-la de outras bactérias presentes em amostras clínicas.
Em resumo, o ágar sal manitol é um meio de cultura seletivo e diferencial que auxilia na identificação de bactérias patogênicas, como o Staphylococcus aureus, com base na capacidade de fermentar o manitol e produzir ácido lático. Sua utilização é fundamental em laboratórios de microbiologia clínica para o diagnóstico preciso de infecções causadas por essas bactérias.
Por que o ágar manitol é seletivo para Staphylococcus aureus?
Um dos principais motivos pelos quais o ágar manitol é seletivo para Staphylococcus aureus é devido à capacidade desta bactéria de fermentar o manitol. O manitol é um açúcar que está presente no ágar manitol, e quando o Staphylococcus aureus o fermenta, produz ácido lático como subproduto. Esse ácido lático diminui o pH do meio de cultura, criando um ambiente ácido que inibe o crescimento de outras bactérias não fermentadoras de manitol.
Além disso, o ágar manitol contém um indicador de pH chamado vermelho de fenol, que muda de cor em resposta à acidez. Quando o Staphylococcus aureus fermenta o manitol e produz ácido lático, o meio de cultura ao redor das colônias da bactéria fica amarelo, indicando a presença da fermentação do manitol. Isso facilita a identificação e distinção do Staphylococcus aureus de outras bactérias que não possuem essa capacidade.
Portanto, o ágar manitol é um meio seletivo para o Staphylococcus aureus devido à sua capacidade de fermentar o manitol e produzir ácido lático, que cria um ambiente inibitório para outras bactérias, juntamente com a mudança de cor do indicador de pH que facilita a identificação da bactéria.
Para que serve o meio de cultivo Manitol Sal e Agar Chapman?
O meio de cultivo Manitol Sal e Agar Chapman serve principalmente para o isolamento e identificação de Staphylococcus aureus em amostras clínicas. Este meio é seletivo para esse tipo de bactéria, pois contém manitol e sal que inibem o crescimento de outras bactérias, permitindo que apenas o Staphylococcus aureus se desenvolva.
O ágar Chapman foi desenvolvido por Chapman em 1945 e é utilizado em laboratórios de microbiologia para análise de amostras clínicas, alimentos e ambientes. A adição de manitol ao meio permite a diferenciação entre as espécies de Staphylococcus, pois apenas o Staphylococcus aureus é capaz de fermentar o manitol, resultando na produção de ácido que leva a uma mudança de cor no meio.
Para preparar o meio de cultivo Manitol Sal e Agar Chapman, basta seguir as instruções da formulação específica, que geralmente inclui a adição de manitol, cloreto de sódio, peptona, ágar e outros componentes que garantem a seletividade e diferenciação desejadas. Após a preparação, o meio deve ser esterilizado e pode ser armazenado por um período de tempo para uso futuro.
Em resumo, o meio de cultivo Manitol Sal e Agar Chapman é uma ferramenta essencial para os microbiologistas na identificação de Staphylococcus aureus em amostras clínicas, permitindo uma análise precisa e confiável para o diagnóstico de infecções causadas por essa bactéria.
Motivo da mudança de cor do ágar manitol após o crescimento de S. aureus.
O ágar manitol é um meio de cultura seletivo utilizado para o isolamento de Staphylococcus aureus em laboratórios de microbiologia. Este meio contém manitol como fonte de carboidratos e um indicador de pH, o vermelho de fenol. Quando o S. aureus cresce no ágar manitol, ele fermenta o manitol, produzindo ácido, que diminui o pH do meio. Como resultado, o indicador de pH muda de vermelho para amarelo, indicando a fermentação do manitol pelo S. aureus.
Sal e ágar manitol: fundação, preparação e usos
O ágar sal manitol ou sal manitol é um sólido de cultura selectivo e diferencial médio. Foi criado por Chapman para o isolamento de patógenos Gram-positivos, especialmente Staphylococcus aureus .
No entanto, também é útil para isolar Staphylococus epidermidis, que pode estar ocasionalmente presente como patógeno oportunista, e Staphylococcus saprophyticus, reconhecido como patógeno urinário, entre outras espécies.
Alguns Enterococos são capazes de crescer neste meio, bem como alguns bacilos Gram positivos formadores de esporos.
Esse meio é muito útil na análise de amostras clínicas, mas também é utilizado no estudo microbiológico de alimentos e no controle de qualidade de produtos industriais, como cosméticos, medicamentos, entre outros.
O ágar salgado de manitol é composto por extratos e peptonas de carne bovina, triptina, manitol, cloreto de sódio , vermelho de fenol e ágar.
Fundação
O agar de manitol é seletivo graças à alta concentração de sal que possui. A salinidade atua como uma substância inibidora e impede o crescimento de bactérias gram-negativas.
Também é diferencial devido à presença de carboidrato de manitol e ao indicador vermelho de pH do fenol. A partir disso, as bactérias capazes de fermentar o manitol produzem ácidos, acidificando o meio, tornando as colônias e o meio amarelo.
Por outro lado, colônias que não fermentam manitol crescem no meio, absorvendo os nutrientes fornecidos pelos extratos de carne, peptonas e triptina. A partir daí, as bactérias extraem o carbono, nitrogênio, vitaminas e minerais necessários para o seu crescimento.
As colônias nesse caso podem ser fracas ou rosa forte, e o meio permanece da mesma cor ou muda para fúcsia.
O ágar é a substância que fornece consistência ao meio ambiente.
Preparação
Para preparar um litro de agar de manitol salgado, 111 g do meio desidratado da casa comercial preferida são pesados e dissolvidos em 1000 ml de água destilada, usando uma fiola.
O calor é aplicado removendo frequentemente o meio para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto.
A fiola é colocada na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Após o tempo, a fiola é removida da autoclave, deixada repousar e servida entre 15 a 20 ml em placas de Petri estéreis quando a temperatura é de aproximadamente 50 a 55 ° C.
É permitido solidificar, solicitando de forma invertida as plaquetas e mantendo na geladeira até seu uso. Antes de semear uma amostra, aguarde a placa atingir a temperatura ambiente.
As placas são semeadas por spline ou por semeadura superficial com uma espátula drigalski. O pH final do meio preparado deve ser 7,4 ± 0,2
A cor do meio desidratado é bege claro e a cor do meio preparado é vermelho alaranjado.
Usos
Devido à sua alta seletividade, este meio é ideal para semear amostras com flora mista, nas quais se busca a presença de Staphylococus aureus , como o principal patógeno desse gênero.
Nesse sentido, um de seus usos mais frequentes é na análise microbiológica de amostras de exsudatos faríngeos e secreção nasal, principalmente para detectar portadores assintomáticos de S. aureus .
Alguns países implementaram essa análise como um requisito obrigatório para pessoas que desejam trabalhar como varejistas de alimentos.
Esse controle evita a contratação de pessoas portadoras de S. aureus , evitando intoxicação alimentar maciça , devido ao consumo de alimentos contaminados com enterotoxina estafilocócica.
Também pode ser incluído no plantio de infecções de feridas, hemoculturas, LCR, lavagem brônquica alveolar, entre outros.
O agar de manitol salgado é útil para reisolar colônias de culturas de urina a partir de ágar CLED ou ágar sanguíneo, cujo Gram revelou cocos Gram positivos em grupos.
Também é válido na análise microbiológica de alimentos, água potável, solos, entre outras aplicações.
Controle de qualidade
Uma vez preparado um lote de placas com agar de manitol salgado, é recomendável realizar um controle de qualidade. Cepas de controle são plantadas para mostrar se há ou não crescimento.
Como controle positivo, podem ser usadas cepas conhecidas de Staphylococcus aureus. Ele deve crescer satisfatoriamente desenvolvendo colônias amarelas e o meio também se torna da mesma cor.
Da mesma forma, é conveniente incluir uma cepa conhecida de Staphylococcus epidermidis. Ele deve crescer satisfatoriamente através do desenvolvimento de colônias cor de rosa, e o meio permanece da mesma cor ou escurece em um rosa mais forte.
Como controle negativo, são utilizadas estirpes que não devem crescer neste meio. Por exemplo, uma cepa conhecida de Escherichia coli ou Klebsiella pneumoniae pode ser semeada . O resultado esperado é a inibição completa, ou seja, nenhum crescimento.
Além disso, uma placa não inoculada deve ser incubada. Nele não deve haver crescimento ou mudança de cor.
É importante que a placa não seja utilizada se houver sinais de deterioração, como contaminação, desidratação, descoloração, entre outros.
Considerações finais
Ao usar meio de agar com manitol salgado, alguns aspectos importantes devem ser levados em consideração:
-O crescimento de colônias amarelas não indica que seja Staphylococcus aureus. Lembre-se de que algumas cepas de Enterococcus são capazes de crescer neste meio e fermentar manitol, bem como em certos bacilos gram-positivos formadores de esporos.
Portanto, é importante fazer um Gram para a colônia e um teste de catalase.
Por outro lado, devemos considerar que outras espécies de Staphylococcus, exceto o aureus, também são capazes de fermentar manitol. Portanto, é importante subcultar a colônia para um caldo de nutrientes para tirar daí e realizar o teste da coagulase.
Entre as espécies de Staphylococcus de importância clínica para o homem que fermenta manitol estão: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum , entre outras.
Outros podem dar uma reação variável, ou seja, algumas vezes positiva e outras negativa. Alguns são S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre outros.
-Não é recomendável tomar colônias diretamente do ágar manitol para realizar o teste da coagulase, uma vez que a alta concentração de sal do meio pode interferir no resultado.
-Finalmente, recomenda-se incubar as placas semeadas de manitol salgado por até 48 horas, porque algumas cepas de S. aureus podem fermentar lentamente o manitol, embora isso não seja muito frequente.
Referências
- Laboratórios britânicos. Agar de manitol salgado. 2015. Disponível em: britanialab.com
- «Ágar manitol salgado».Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 31 de outubro de 2018 às 19:08 UTC. 17 Jan 2019, 20:55, disponível em: en.wikipedia.org.
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- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
- Laboratórios BD BD Agar de sal de manitol. 2013. Disponível em: bd.com.