Ágar de bismuto sulfito: fundação, preparação e usos

O ágar sulfito de bismuto é um sólido meio de cultura selectivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Salmonella entérica subespécie entérica Typhi serotipo, entre outras espécies de Salmonella. O meio é conhecido como ágar BSA pelo acrônimo Bismuth Sulfite Agar.

A fórmula original do agar de bismuto sulfito foi criada em 1927 por Wilson e Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Continha sulfito de sódio, glicose, solução de bismuto, citrato de amônio, sulfato ferroso e ágar-ágar.

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Crescimento de 48 horas de incubação de Salmonella sp em ágar bismuto sulfito. Fonte: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP

Hoje existe uma modificação do meio original, consistindo em extrato de carne, peptonas de carne e caseína, indicador de sulfito de bismuto, glicose, fosfato dissódico, sulfato ferroso, ágar verde-claro e ágar.

Existem muitos meios para o isolamento de espécies de Salmonella, mas quando se trata de recuperar o sorotipo Typhi, o ágar bismuto sulfito tem uma vantagem notável sobre eles, uma vez que, na maioria, é obtida uma recuperação muito baixa ou inexistente desse microrganismo. .

No entanto, é necessário usar mais de um tipo de meio quando se trata de isolar enteropatógenos, porque o ágar de bismuto sulfito é menos eficaz para outras espécies de Salmonella e para o gênero Shigella, que são inibidos ou se desenvolvem muito mal. neste ágar.

Deve-se notar que, de todas as espécies de Salmonella, o sorotipo Typhi é um dos enteropatógenos mais importantes nos seres humanos, sendo este o seu único reservatório. Este serovar causa febre tifóide, gastroenterite, bacteremia e septicemia.

Por esse motivo, é relevante incluir esse ágar na análise de amostras de água, fezes ou alimentos em que se suspeite de sua presença.

Fundação

Como a maioria dos meios de cultura, o ágar bismuto sulfito contém substâncias nutritivas para promover o desenvolvimento bacteriano, como peptonas e extrato de carne. Da mesma forma, a glicose funciona como fonte de energia e carbono.

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Agora, nem todas as bactérias crescerão neste meio, uma vez que o ágar bismuto sulfito é um meio seletivo. Contém compostos que inibem o crescimento de microorganismos Gram-positivos e certas bactérias Gram-negativas. Esses compostos são: o indicador de sulfito de bismuto e o verde brilhante.

Por sua vez, o fosfato dissódico mantém a osmolaridade e o pH do meio.

Além disso, ágar sulfito de bismuto é uma forma diferencial devido à presença de sulfato ferroso, que mostra a formação de H 2 S. O H 2 S formados por bactérias reage com sulfato ferroso e forma um precipitado preto insolúvel claramente visível.

Finalmente, o ágar-ágar fornece a consistência sólida ao meio.

Preparação

Pesar 52,3 gramas do meio desidratado e dissolver em um litro de água. Aqueça até ferver a mistura por 1 minuto, com agitação frequente, até sua dissolução total. Não superaqueça. Este meio não é autoclavado, porque o calor extremo danifica o meio de cultura.

Deixe esfriar até 45 ° C e mexa antes de servir em placas de Petri estéreis. Recomenda-se fazer chapas com boa espessura. Para isso, devem ser derramados 25 ml em cada prato. Deixe solidificar. Como é um meio que não é esterilizado, é normal que o uso imediato seja sugerido.

No entanto, um estudo realizado por D’aoust em 1977, mostrou que há uma melhor recuperação de Salmonella typhimurium e Salmonella enteritidis como as idades médias do sulfito de bismuto, não afetando o desempenho dos sorovares Typhi e Paratyphi B.

D’aoust recomenda o uso das placas no dia 4 de refrigeração, embora ele avise que, à medida que a idade média diminui, a seletividade diminui, desenvolvendo cepas de Proteus vulgaris com mais facilidade .

É por isso que, para amostras fortemente contaminadas, como fezes, é preferível usar o meio preparado na hora. Caso contrário, use no dia 4 de sua preparação. Outros autores recomendam o uso das placas no dia seguinte à sua preparação, armazenadas em refrigeração.

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As placas refrigeradas devem ser temperadas antes do uso. O pH do meio deve ser 7,5 ± 0,2. A cor do meio não preparado é bege e preparada é cinza esverdeado opalescente.

Usos

Entre as amostras que podem ser semeadas neste meio estão amostras de fezes, bebidas ou águas residuais e alimentos.

Para melhorar os isolados, recomenda-se realizar um tratamento de pré-enriquecimento com caldo de lactose e, em seguida, enriquecer com caldo de tetrationato ou caldo de selenito e cistina, antes de semear no ágar de bismuto sulfito.

As placas são incubadas a 35 ° C ± 0,2 por 24 a 48 horas, em aerobiose.

Características das colônias em ágar bismuto sulfito

As colônias de Salmonella Typhi geralmente são vistas neste ágar em 24 horas, com um centro preto e cercadas por uma auréola verde brilhante. Enquanto, em 48 horas, eles ficam completamente pretos devido à formação de sulfeto de hidrogênio.

A Salmonella Paratyphi A possui colônias com características variáveis. Após 18 horas de incubação, podem ser observadas colônias pretas, verdes ou transparentes com aparência mucóide.Enquanto isso, às 48 horas eles são completamente pretos e às vezes com um brilho metálico pronunciado.

S. Paratyphi A tende a escurecer o ambiente ao redor da colônia.

Salmonella sp mostra colônias pretas ou cinza esverdeadas, com ou sem brilho metálico, escurecendo o ambiente circundante ou não.

As cepas de coliformes geralmente são totalmente inibidas, mas, se crescem, desenvolvem-se como colônias opacas verde ou marrom, sem brilho metálico. Não tinja o meio ao redor da colônia.

Limitação

– Inóculos muito fracos podem originar colônias verde-claras de Salmonella Typhi , passando despercebidas e relatando a cultura como negativa.

– O ágar bismuto sulfito pode inibir a recuperação de algumas espécies de Salmonella, como S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.

-Este meio inibe a maioria das espécies do gênero Shigella.

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S. Typhi e S. arizonae podem dar colônias muito semelhantes.

-As coliformes produzir H 2 S, tais como Proteus e Citrobacter produzir semelhante a colónias de Salmonella, por isso é necessário testes bioquímicos identificação.

-Você deve executar uma boa estriação para obter colônias isoladas; É a única maneira de observar as características típicas das colônias do gênero Salmonella.

Controle de qualidade

Para controle de esterilidade, uma placa não inoculada é incubada a 37 ° C, espera-se que não haja crescimento, nem mudança de cor.

Para controle de qualidade, cepas conhecidas como:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Espera- se que Escherichia coli e Shigella flexneri sejam parcialmente inibidas pelo desenvolvimento de colônias marrom-esverdeada e marrom, respectivamente.Enquanto isso, ambas as salmonelas devem ter um excelente desenvolvimento com colônias negras com brilho metálico e, finalmente, Enterococcus faecalis deve ser totalmente inibido.

Referências

  1. Wilson, W. & EM McV. Blair Uso de um Meio de Ferro Glicose Bismuto Sulfito para o Isolamento de B. typhosus e B. proteus .O Jornal de Higiene, 1927; 26 (4), 374-391. Obtido em .jstor.org
  2. D’aoust JY. Efeito das condições de armazenamento do desempenho do ágar bismuto sulfito.J Clin Microbiol . 1977; 5 (2): 122-124. Disponível em: ncbi.nlm.nih.gov
  3. Laboratórios de DIV. Agar de bismuto-sulfito de acordo com WILSON-BLAIR. 2009. Disponível em: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
  4. Laboratórios Himedia. Agar de sulfito de bismuto. 2017. Disponível em: himedialabs.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  6. Morales R, de Cruz D, Leyva G e Ybarra M. Qualidade bacteriológica do leite de cabra cru produzido em Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54

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