Ágar de fubá: fundação, preparação e uso

O agar de farinha de milho é um meio de cultura sólido, baixo poder nutritivo, útil para a repicagem de certos fungos e para demonstrar clamidporos em estirpes do complexo de Cândida albicans . Em inglês, é conhecido como ágar de farinha de milho.

O meio de fubá convencional tem uma composição muito simples, contém fubá, ágar-ágar e água. Devido ao seu baixo nível nutricional, é ideal para uso na manutenção de linhagens de fungos por períodos moderados, principalmente fungos negros.

Ágar de fubá: fundação, preparação e uso 1

A. Representação gráfica do complexo de Candida albicans em ágar de fubá. B. Clamidosporos do complexo de Candida albicans vistos ao microscópio, formados em ágar de fubá. Fonte: A. GrahamColm [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)[/ B. Por: CDC / Dr. William Kaplan, Cortesia: Public Health Image Library.

A esporulação do complexo de Candida albicans é favorecida neste meio, se 1% de Tween 80 for adicionado durante a preparação do ágar. A formação de clamidosporos é característica dessa espécie e praticamente a única que afeta o ser humano.

Existem outras espécies que formam clamidosporos, mas é improvável que afetem os seres humanos, como Candida australis, presente nos excrementos de pinguins, ou C. clausenii, que é um saprófito raramente encontrado. Da mesma forma, excepcionalmente as espécies C. stellatoidea e C. tropicalis poderiam formar essas espécies .

Por outro lado, a adição de glicose ao meio da farinha de milho favorece a formação de pigmentos nas cepas de Trichophytom rubrum.

É importante notar que existem fungos que não formam hifas , nem pseudo-hifas no ágar de fubá, como Cryptococcus neoformans, diferindo de outros gêneros.

O ágar de fubá pode ser preparado em casa no laboratório ou também podem ser usados ​​meios comerciais.

Fundação

O fubá é o substrato, o ágar é o agente solidificante e a água é o solvente.

O ágar de fubá pode ser suplementado com tween 80 (poliéster 80 de monooleato de sorbitano ou polissorbato). Este composto diminui a tensão superficial do meio pelo seu poder emulsificante.

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Também cria um ambiente hostil que inibe a multiplicação exagerada de células e estimula o crescimento de hifas , favorecendo também a produção de clamidosporos; o último considerou estruturas de resistência. Essa estrutura ajuda na identificação das espécies de Candida albicans .

Por outro lado, a glicose neste meio aumenta a capacidade de formação de pigmentos de alguns fungos.

Deve-se notar que a farinha de milho média com glicose não serve para demonstrar clamidosporos no complexo Candida albicans .

Preparação

Preparação de ágar de fubá caseiro

Pesar 47 gr de farinha de milho amarela e dissolver em 500 ml de água destilada . Aqueça a 60 ° C, enquanto agita a preparação em um período aproximado de 1 hora. Em seguida, filtre através de um pedaço de gaze e algodão, opcionalmente, pode ser filtrado novamente passando a preparação por um papel de filtro Whatman No. 2.

Complete o volume para 1000 ml com água destilada. Adicione 17 gr de ágar-ágar e aqueça até dissolver. Autoclave por 15 minutos a 121 ° C.

Sirva em placas de Petri estéreis. Guarde na geladeira

A cor do meio preparado é esbranquiçada, com aparência irregular.

Se você deseja preparar a farinha de milho com glicose para a preparação descrita acima, adicione 10 g de glicose.

Ágar de fubá comercial

Pesar 17 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura pode ser aquecida, mexendo suavemente para dissolver completamente. Esterilize em autoclave a 121 ° C, a 15 lb, por 15 minutos.

Despeje em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar. Inverta e guarde na geladeira até o uso. Tempere antes de usar.

O pH deve ser 6,0 ± 0,2 a 25 ° C.

Agar de fubá com Tween 80

Para cumprir a ISO 18416, o ágar de fubá deve ser preparado da seguinte maneira:

Pese 65 gr por litro e adicione 10 ml de Tween 80. Aqueça e ferva por alguns minutos até dissolver, tomando cuidado para não superaquecer. Esterilizar a 121 ° C por 15 minutos.

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Farinha de milho ágar com glicose

Para melhorar o poder cromogênico das colônias de Trichophyton rubrum e diferenciá-las de T. mentagrophytes , 0,2% de glicose pode ser adicionada à fórmula original. Você não precisa ter Tween 80, pois a glicose inibe a formação de clamidosporos.

Use

Principalmente, o uso de ágar de fubá é destinado ao estudo de linhagens de Candida, auxiliando na sua identificação através da observação característica de clamidosporos nas espécies albicans. Ou seja, o uso deste ágar serve como um método auxiliar de identificação dessas leveduras.

Neste ágar, espécies tanto saprófitas quanto patogênicas podem se desenvolver, mas cada uma forma estruturas miceliais características. Por exemplo, espécies do gênero Torulopsis não produzem micélio e se reproduzem apenas por blastoconídios.

Da mesma forma, as espécies Trichosporon e Geotrichum produzem artroconídios no ágar de fubá e, às vezes, é difícil distinguir entre elas.

Os artroconídios do gênero Geotrichum produzem uma extensão de hifas que se assemelham a um taco de hóquei.

Também a produção de pigmentos usando ágar de fubá suplementado com glicose é útil na identificação de Trichophytom rubrum.

Semeado

No ágar de fubá, as subculturas suspeitas de Candida obtidas no meio primário de cultura – o ágar Sabouraud – são subcultivadas, provenientes de amostras clínicas, cosméticos, solos, entre outras. O meio é semeado e incubado a 22 ° C por 24 a 48 horas. O tempo de incubação pode ser prolongado, se necessário.

Clamidospores show

Para esse fim, o ágar de farinha de milho com Tween 80 deve ser inoculado usando a técnica Dalmau. Esse método consiste em levar com a alça de platina uma parte da colônia suspeita e fazer três cortes paralelos no meio, mantendo a alça em 45º. Os cortes devem ser separados a uma distância de 1 cm entre eles.

Posteriormente, um objeto de cobertura previamente queimado é colocado nas estrias semeadas, de modo que a metade seja coberta e a outra descoberta.

Incubar as placas semeadas a 30 ° C por 48-72 h e, em seguida, examinar ao microscópio através da tampa do objeto.

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Manutenção de linhagens de fungos

Para a manutenção das cepas, as placas cultivadas e semeadas são armazenadas em uma geladeira (4 a 8 ºC). Dessa forma, eles podem durar várias semanas e ser usados ​​para fins de ensino ou pesquisa.

Controle de qualidade

Para controle de esterilidade, uma placa não inoculada é incubada à temperatura ambiente, espera-se que não haja crescimento, nem mudança de cor.

Cepas conhecidas podem ser semeadas para controle de qualidade, tais como: Staphylococcus aureus , ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Os resultados esperados são inibição parcial para S. aureus e E. coli. Embora seja esperado um crescimento satisfatório no restante das cepas.

O Aspergillus niger cresce com colônias negras e esporuladas em aproximadamente 5 dias de incubação.

Colônias levaduriformes de Candida albicans com produção de clamidosporos.

Saccharomyces cerevisiae produz grandes células levaduriformes.

Limitações

Um precipitado amarelo se forma no fundo da placa que não deve ser confundido com colônias.

Referências

  1. Laboratórios Neogen Agar De Farinha De Milho. Disponível em: foodsafety.neogen.com.
  2. Microkit Culture Media. Agar De Farinha De Milho. Disponível em: mediacultivo.com.
  3. Linares M, Solís F. Guia de identificação de leveduras. Disponível em: http: //www.guia.revibero.
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