O Agar ETI, também conhecido como Agar Eritritol Telurite, é um meio de cultura seletivo amplamente utilizado em microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias do gênero Clostridium difficile. Ele é composto por agar, eritritol e telurito de potássio, que inibem o crescimento de outras bactérias, permitindo que apenas as bactérias alvo se desenvolvam no meio. Neste artigo, discutiremos os fundamentos do Agar ETI, seu método de preparação e suas principais utilizações em laboratórios de microbiologia.
Quais tipos de ágar promovem o crescimento de bactérias E. coli?
Existem diversos tipos de ágar que promovem o crescimento de bactérias E. coli, sendo um dos mais utilizados o ágar ETI. Este tipo de ágar é especialmente formulado para fornecer os nutrientes necessários para o desenvolvimento saudável das bactérias E. coli, permitindo sua proliferação em condições laboratoriais.
O ágar ETI é preparado a partir de ingredientes específicos que favorecem o crescimento das bactérias E. coli, garantindo assim resultados precisos e confiáveis em estudos e testes microbiológicos. Além disso, sua composição balanceada contribui para a formação de colônias distintas e bem definidas, facilitando a identificação e análise das bactérias presentes nas amostras analisadas.
Por sua eficácia e versatilidade, o ágar ETI é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia para o cultivo e isolamento de bactérias E. coli, auxiliando no diagnóstico de infecções e no monitoramento de alimentos e águas contaminadas. Sua aplicação é fundamental para a pesquisa científica e para a garantia da segurança e qualidade em diversos setores da indústria.
Em resumo, o ágar ETI é um meio de cultura essencial para promover o crescimento e desenvolvimento das bactérias E. coli, sendo fundamental para a realização de testes e análises microbiológicas. Sua composição específica e propriedades únicas o tornam uma ferramenta indispensável para a detecção e identificação precisa desses microrganismos em diferentes contextos.
Preparando um meio de cultura MacConkey para cultivo bacteriano em laboratório.
Para preparar um meio de cultura MacConkey para cultivo bacteriano em laboratório, é necessário seguir alguns passos simples. O meio de cultura MacConkey é um meio seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bactérias Gram negativas, principalmente coliformes.
Para preparar o meio de cultura MacConkey, deve-se adicionar os componentes do meio de MacConkey Agar à água destilada e aquecer até dissolver completamente. Em seguida, o pH do meio deve ser ajustado para 7.1 a 7.3, e o meio deve ser esterilizado por autoclavagem a 121°C por 15 minutos.
O meio de cultura MacConkey é composto por lactose, peptona, extrato de carne, bile de boi, cristal violeta, vermelho de neutro e ágar. A bile de boi e os corantes tornam o meio seletivo para bactérias Gram negativas, enquanto a lactose permite a diferenciação entre bactérias lactose positivas e lactose negativas.
O meio de cultura MacConkey é amplamente utilizado em laboratórios para o isolamento e identificação de bactérias patogênicas, especialmente em amostras clínicas. É importante seguir as instruções de preparo e armazenamento do meio de cultura para garantir resultados precisos e confiáveis nas culturas bacterianas.
Em resumo, a preparação do meio de cultura MacConkey é um processo simples que requer atenção aos detalhes para garantir resultados precisos no cultivo bacteriano em laboratório.
Agar ETI: fundamento, preparação e utilizações
O ágar ETI ou ágar de ferro e açúcar triplo é um meio sólido, o qual serve como um teste bioquímico para guiar a identificação inicial de bactérias Gram-negativas. Baseia-se em evidências da fermentação dos açúcares presentes e da produção de sulfeto de hidrogênio e gás.
Sua composição e fundação é muito semelhante ao teste de ferro Kligler, com a diferença de que este último contém apenas glicose e lactose. Em vez disso, como o nome indica, o ágar-ferro com açúcar triplo contém três carboidratos fermentáveis: glicose, lactose e sacarose.
Além disso, o meio TSI possui quatro derivados de proteínas que o tornam um ágar muito nutritivo: extrato de levedura, extrato de carne, peptona e peptona protéica. Também contém sulfato de amônio ferroso, tiossulfato de sódio , cloreto de sódio , vermelho de fenol e ágar.
A incapacidade de um microrganismo fermentar a glicose presente no ambiente imediatamente o exclui de pertencer à família Enterobacteriaceae. Portanto, esse teste é essencial para decidir qual rota de identificação deve ser adotada para determinar o gênero e a espécie.
Cada laboratório decide se trabalha com o ágar TSI ou com o ágar Kligler.
Fundação
Cada um dos compostos desempenha um papel no ambiente.
Cloreto de Sódio e Ágar
O cloreto de sódio é necessário para manter o equilíbrio osmótico do meio. Enquanto o ágar dá a consistência sólida.
Indicador de PH (vermelho de fenol)
O pH do meio preparado é equilibrado em 7,3 e o indicador de pH (vermelho de fenol) fica amarelo abaixo de 6,8. Isso significa que pequenas quantidades de ácidos produzidos pela fermentação dos açúcares transformarão o meio vermelho alaranjado em amarelo.
Se a fermentação não ocorrer, haverá alcalinização do meio pelo uso das peptonas, passando de vermelho-laranja para vermelho forte.
Derivados de proteínas (extrato de levedura, extrato de carne, peptona e proteína peptona)
Quando as bactérias metabolizam as proteínas presentes no ágar TSI, são produzidas aminas que alcalinizam o meio (principalmente no nível do chanfro), porque a reação precisa de oxigênio. As aminas fazem o chanfro ficar vermelho forte.
Mas isso vai depender da capacidade das bactérias fermentarem carboidratos ou não.
Fermentação de carboidratos (glicose, lactose e sacarose)
O estudo da fermentação do açúcar pode dar várias imagens e cada uma é interpretada de maneira diferente. A interpretação do teste divide os microrganismos em três categorias: fermentadores sem glicose, fermentadores sem lactose e fermentadores com lactose / sacarose.
Deve-se notar que a quantidade de glicose no meio é limitada, enquanto a concentração de lactose e sacarose é 10 vezes maior.
Bactérias da família Enterobacteriaceae e outros microrganismos fermentadores de glicose começarão a fermentar esse açúcar, porque é o carboidrato mais simples para energia.
Por outro lado, lactose e sacarose são carboidratos complexos que precisam ser decompostos e convertidos em glicose para que possam entrar no ciclo de Embden-Meyerhof.
Microrganismos não fermentativos da glicose
Quando o microorganismo inoculado não é capaz de fermentar glicose, muito menos pode fermentar outros carboidratos. Portanto, nenhum ácido é formado aqui, mas há formação de aminas no chanfro devido ao uso de peptonas.
Nesse caso, o painel fica vermelho mais forte e a parte inferior do tubo pode permanecer inalterada ou também alcalina, deixando todo o tubo vermelho.
Interpretação: K / K significa chanfro alcalino / fundo alcalino ou neutro
Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo D.
Este resultado indica que o microrganismo não pertence à família Enterobacteriaceae.
-Microrganismos não fermentativos de lactose / sacarose
Se as bactérias forem capazes de fermentar glicose, mas não lactose ou sacarose, ocorrerá o seguinte:
A bactéria consumirá toda a glicose presente após aproximadamente 6 a 8 horas, podendo acidificar o chanfro e o taco; isto é, o ágar terá ficado completamente amarelo. Mas quando a glicose está esgotada e antes da impossibilidade de usar lactose e sacarose, a bactéria inicia o metabolismo das proteínas.
Essa reação precisa de oxigênio, portanto a degradação das peptonas ocorre na superfície (chanfro). As aminas produzidas alcalinizam o painel, ficando amarelo para vermelho. Esta reação é evidenciada entre 18 e 24 horas de incubação.
Interpretação: K / A significa chanfro alcalino e ácido taco.
Na imagem no início do artigo, veja a imagem do tubo B.
-Microrganismos fermentadores de lactose / sacarose
Microrganismos capazes de fermentar lactose e sacarose obviamente podem fermentar glicose. Depois que a quantidade mínima de glicose presente no meio é esgotada, o piruvato formado começa a ser metabolizado para formar ácidos através do ciclo aeróbico de Krebs e, no período de 8 a 12 horas, todo o meio fica amarelo.
Se as bactérias conseguirem desdobrar a lactose ou sacarose, os ácidos continuarão sendo produzidos e, após 18 a 24 horas, todo o tubo – chanfro e taco – continuará amarelo.
Deve-se notar que o uso de glicose é realizado de duas maneiras: uma na forma aeróbica no chanfro do tubo e a outra na forma anaeróbica no fundo do tubo.
Interpretação: A / A significa chanfro ácido / fundo ácido. Pode apresentar gás ou não.
Na imagem no início do artigo, veja a imagem do tubo A.
Produção de gás
Alguns microorganismos são capazes de produzir gás durante a fermentação de açúcares. O gás é evidenciado no tubo pela pressão que exerce dentro do ágar. A pressão causa a formação de bolhas ou o deslocamento do ágar. Às vezes, a formação de gás pode fraturar o ambiente.
É importante que, no momento da semeadura do meio da ETI, a punção seja realizada de forma limpa através do centro do ágar até atingir o fundo. Se a punção for desviada para as paredes do tubo, poderá causar falsos positivos na produção do gás, uma vez que escapará através do canal formado incorretamente.
A produção de gás, bem como as reações que ocorrem no chanfro do ágar, precisam de oxigênio, portanto, recomenda-se que o tubo seja tapado com um tampão de algodão e, se for usada uma tampa de baquelite, não deverá ser totalmente ajustado.
A produção de gás é relatada como positiva (+) ou negativa (-).
Tiossulfato de sódio e sulfato de amônio ferroso ( produção de sulfeto de hidrogênio)
As bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio (gás incolor) absorvem o enxofre do tiossulfato de sódio presente no meio. Uma vez formado o H 2 S reage com sulfato de amónio ferroso, sulfureto de ferro produzindo (precipitado preto claramente visível).
A produção de H 2 S é classificado como positivo (+) ou negativa (-).
Na imagem encontrada no início do artigo, veja a imagem do tubo C.
Preparação
Pesar 62,5 g do ágar médio de açúcar triplo de ferro (ETI) desidratado e dissolver em um litro de água destilada.
Aqueça até o ágar estar completamente dissolvido. Ferva por um minuto, mexendo sempre. Distribua 4 ml do meio nos tubos de ensaio 13/100 com tampa de algodão.
Esterilizar em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe-a ficar inclinada. Deve-se tomar cuidado para que a base e o chanfro tenham a mesma distância.
Conservar no frigorífico 2-8 ° C. Deixe temperar antes de semear a cepa bacteriana.
A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é vermelho-laranja
O pH final do meio preparado é 7,3 ± 0,2.
Usos
O teste TSI é amplamente utilizado no laboratório de microbiologia. Este teste é essencial para orientar o tipo de teste que deve ser aplicado para identificar o gênero e a espécie.Sua boa execução e interpretação podem economizar material e mão de obra.
Se o resultado for uma ETI K / K e o teste do citocromo oxidase for positivo, sabe-se que testes para a identificação de bacilos Gram-negativos não fermentativos, como Pseudomonas, Alcalino, Achromobacter, Burkholderia, entre outros gêneros, devem ser utilizados. Se for oxidase negativa, está orientada para Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc.
Por outro lado, se uma ETI A / A ou K / A for obtida e o teste do citocromo oxidase for negativo, reduzindo ainda mais os nitratos em nitritos, teremos certeza de que é um microorganismo pertencente à família Enterobacteriaceae. Nesse caso, a rota de identificação será direcionada para testes específicos para esse grupo de bactérias.
Por outro lado, se uma imagem K / A ou A / A for obtida e o teste do citocromo oxidase for positivo, os testes adicionais a serem montados serão direcionados à identificação de cepas de fermentação que não pertencem à família Enterobacteriaceae, como Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio e Pasteurella.
Uma ETI com sulfeto de hidrogênio, oxidase negativa, orientará a identificação dos seguintes gêneros da família Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella , Leminorella, Pragia, Trabusiella ou Salmonella.
Um sulfureto de ETI baixo ou moderado de hidrogénio no bisel inferior alcalino alcalino e um guia de teste positivo oxidase para utilizar para identificação de hastes gram-negativas fermentativa não produtoras de H 2 S, tais como a Shewanella putrefaciens .
Finalmente, a ETI pode ser usada para investigar a produção de sulfeto de hidrogênio em bacilos Gram-positivos, principalmente quando há suspeita de Erysipelothrix rhusiopathiae.
Semeado
O meio da ETI deve ser inoculado com colônias puras, isoladas em culturas primárias ou seletivas. Se a colônia for retirada de meios seletivos que foram semeados com amostras de flora mista, deve-se tomar cuidado apenas para retirar da superfície, pois na parte inferior da colônia pode haver cepas viáveis inibidas nesse meio.
Portanto, você nunca deve esfriar a alça em um meio seletivo e, em seguida, pegue a colônia e inocule um meio TSI.
A semeadura será feita com uma agulha ou ansa reta. Uma punção será realizada, tomando cuidado para que ela atravesse o centro do meio até atingir o fundo e, em seguida, a semeadura termine inoculando a superfície em zigue-zague. Não faça duas perfurações.
Incubar a 37 ° C em aerobiose por 18-24 horas. Interprete neste momento, nem antes nem depois.
Limitações
O teste da ETI deve ser lido entre 18 a 24 horas de incubação. Uma leitura antes desse período pode dar um falso positivo da fermentação A / A. Embora uma leitura posterior nesse momento possa levar a uma imagem negativa falsa de não fermentador, devido ao consumo de peptonas que alcalinizam o meio.
Referências
- Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- «Agar TSI.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 10 de julho de 2018 às 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Disponível em: en.wikipedia.org
- Laboratórios britânicos. Agar ETI (Agar Triplo Ferro-Açúcar). 2015. Disponível em: britanialab.com
- Laboratórios BD Agar de açúcar e açúcar triplo (TSI Agar). 2003. Disponível em: bd.com