Sal e ágar manitol: fundação, preparação e usos

O ágar sal manitol ou sal manitol é um sólido de cultura selectivo e diferencial médio. Foi criado por Chapman para o isolamento de patógenos Gram-positivos, especialmente Staphylococcus aureus .

No entanto, também é útil para isolar Staphylococus epidermidis, que pode estar ocasionalmente presente como patógeno oportunista, e Staphylococcus saprophyticus, reconhecido como patógeno urinário, entre outras espécies.

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A. Fiola preparado com agar de manitol meio salgado. B. Placas de agar de manitol salgadas semeadas com cepas de manitol fermentativas e não fermentativas bacterianas. Fonte: A e B: Fotos tiradas pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Alguns Enterococos são capazes de crescer neste meio, bem como alguns bacilos Gram positivos formadores de esporos.

Esse meio é muito útil na análise de amostras clínicas, mas também é utilizado no estudo microbiológico de alimentos e no controle de qualidade de produtos industriais, como cosméticos, medicamentos, entre outros.

O ágar salgado de manitol é composto por extratos e peptonas de carne bovina, triptina, manitol, cloreto de sódio , vermelho de fenol e ágar.

Fundação

O agar de manitol é seletivo graças à alta concentração de sal que possui. A salinidade atua como uma substância inibidora e impede o crescimento de bactérias gram-negativas.

Também é diferencial devido à presença de carboidrato de manitol e ao indicador vermelho de pH do fenol. A partir disso, as bactérias capazes de fermentar o manitol produzem ácidos, acidificando o meio, tornando as colônias e o meio amarelo.

Por outro lado, colônias que não fermentam manitol crescem no meio, absorvendo os nutrientes fornecidos pelos extratos de carne, peptonas e triptina. A partir daí, as bactérias extraem o carbono, nitrogênio, vitaminas e minerais necessários para o seu crescimento.

As colônias nesse caso podem ser fracas ou rosa forte, e o meio permanece da mesma cor ou muda para fúcsia.

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O ágar é a substância que fornece consistência ao meio ambiente.

Preparação

Para preparar um litro de agar de manitol salgado, 111 g do meio desidratado da casa comercial preferida são pesados ​​e dissolvidos em 1000 ml de água destilada, usando uma fiola.

O calor é aplicado removendo frequentemente o meio para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto.

A fiola é colocada na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Após o tempo, a fiola é removida da autoclave, deixada repousar e servida entre 15 a 20 ml em placas de Petri estéreis quando a temperatura é de aproximadamente 50 a 55 ° C.

É permitido solidificar, solicitando de forma invertida as plaquetas e mantendo na geladeira até seu uso. Antes de semear uma amostra, aguarde a placa atingir a temperatura ambiente.

As placas são semeadas por spline ou por semeadura superficial com uma espátula drigalski. O pH final do meio preparado deve ser 7,4 ± 0,2

A cor do meio desidratado é bege claro e a cor do meio preparado é vermelho alaranjado.

Usos

Devido à sua alta seletividade, este meio é ideal para semear amostras com flora mista, nas quais se busca a presença de Staphylococus aureus , como o principal patógeno desse gênero.

Nesse sentido, um de seus usos mais frequentes é na análise microbiológica de amostras de exsudatos faríngeos e secreção nasal, principalmente para detectar portadores assintomáticos de S. aureus .

Alguns países implementaram essa análise como um requisito obrigatório para pessoas que desejam trabalhar como varejistas de alimentos.

Esse controle evita a contratação de pessoas portadoras de S. aureus , evitando intoxicação alimentar maciça , devido ao consumo de alimentos contaminados com enterotoxina estafilocócica.

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Também pode ser incluído no plantio de infecções de feridas, hemoculturas, LCR, lavagem brônquica alveolar, entre outros.

O agar de manitol salgado é útil para reisolar colônias de culturas de urina a partir de ágar CLED ou ágar sanguíneo, cujo Gram revelou cocos Gram positivos em grupos.

Também é válido na análise microbiológica de alimentos, água potável, solos, entre outras aplicações.

Controle de qualidade

Uma vez preparado um lote de placas com agar de manitol salgado, é recomendável realizar um controle de qualidade. Cepas de controle são plantadas para mostrar se há ou não crescimento.

Como controle positivo, podem ser usadas cepas conhecidas de Staphylococcus aureus. Ele deve crescer satisfatoriamente desenvolvendo colônias amarelas e o meio também se torna da mesma cor.

Da mesma forma, é conveniente incluir uma cepa conhecida de Staphylococcus epidermidis. Ele deve crescer satisfatoriamente através do desenvolvimento de colônias cor de rosa, e o meio permanece da mesma cor ou escurece em um rosa mais forte.

Como controle negativo, são utilizadas estirpes que não devem crescer neste meio. Por exemplo, uma cepa conhecida de Escherichia coli ou Klebsiella pneumoniae pode ser semeada . O resultado esperado é a inibição completa, ou seja, nenhum crescimento.

Além disso, uma placa não inoculada deve ser incubada. Nele não deve haver crescimento ou mudança de cor.

É importante que a placa não seja utilizada se houver sinais de deterioração, como contaminação, desidratação, descoloração, entre outros.

Considerações finais

Ao usar meio de agar com manitol salgado, alguns aspectos importantes devem ser levados em consideração:

-O crescimento de colônias amarelas não indica que seja Staphylococcus aureus. Lembre-se de que algumas cepas de Enterococcus são capazes de crescer neste meio e fermentar manitol, bem como em certos bacilos gram-positivos formadores de esporos.

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Portanto, é importante fazer um Gram para a colônia e um teste de catalase.

Por outro lado, devemos considerar que outras espécies de Staphylococcus, exceto o aureus, também são capazes de fermentar manitol. Portanto, é importante subcultar a colônia para um caldo de nutrientes para tirar daí e realizar o teste da coagulase.

Entre as espécies de Staphylococcus de importância clínica para o homem que fermenta manitol estão: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum , entre outras.

Outros podem dar uma reação variável, ou seja, algumas vezes positiva e outras negativa. Alguns são S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre outros.

-Não é recomendável tomar colônias diretamente do ágar manitol para realizar o teste da coagulase, uma vez que a alta concentração de sal do meio pode interferir no resultado.

-Finalmente, recomenda-se incubar as placas semeadas de manitol salgado por até 48 horas, porque algumas cepas de S. aureus podem fermentar lentamente o manitol, embora isso não seja muito frequente.

Referências

  1. Laboratórios britânicos. Agar de manitol salgado. 2015. Disponível em: britanialab.com
  2. «Ágar manitol salgado».Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 31 de outubro de 2018 às 19:08 UTC. 17 Jan 2019, 20:55, disponível em: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  5. Laboratórios BD BD Agar de sal de manitol. 2013. Disponível em: bd.com.

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