Stuart medium: fundação, preparação e usos

O meio de Stuart é um meio de ágar semi-sólido ou caldo sem nutrientes, utilizado para o transporte de amostras biológicas. Seu objetivo é manter as linhagens presentes na amostra viáveis ​​por um certo tempo, mas sem aumentar a população microbiana.

Foi criado por Moffet, Young e Stuart em 1948 e posteriormente modificado por Toshach e Patsula. É composto de glicerofosfato de sódio, tioglicolato de sódio, cloreto de cálcio e ágar-ágar. Este último está presente no meio semi-sólido e ausente no líquido. Alguns laboratórios adicionam azul de metileno.

Stuart medium: fundação, preparação e usos 1

Culturette com o meio de transporte Stuart. Fonte: Por: CDC / Dr. Gilda Jones, Cortesia: Public Health Image Library

Eles são geralmente usados ​​quando não é possível semear a amostra imediatamente. Nesse caso, a amostra é colocada no meio de transporte, enquanto é transferida para o laboratório que processará a cultura.

Isso garante que os microrganismos presentes sejam mantidos vivos até serem inoculados no meio de cultura correspondente.

Inicialmente, seu uso era destinado ao transporte de amostras uretrais ou vaginais, onde se suspeitava da presença de Neisseria gonorrhoeae . Posteriormente, eles perceberam que sua utilidade poderia ser mais ampla.

O meio Stuart mostrou-se muito eficiente na preservação de microrganismos lábeis e exigentes, como Neisseria meningitidis , Haemophilus influenzae , Streptococcus pyogenes , Streptococcus pneumoniae , Corynebacterium diphteriae , Bordetella pertusis , entre outros. Além de outros microrganismos não incômodos, como Enterobactérias.

O meio Stuart basicamente impede a secagem da amostra, mantém o equilíbrio osmótico e preserva os microorganismos em um pH ideal. Por outro lado, estrategicamente este meio não contém nutrientes, impedindo a multiplicação de microorganismos.

No mercado, existem dispositivos especiais de transporte de amostras que contêm esse ou outros meios de transporte, chamados culturette. Eles também podem ser preparados em laboratório.

Fundação

O objetivo do meio de transporte Stuart é manter as amostras o mais próximo possível do estado original, até que sejam processadas.

O glicerofosfato de sódio e o cloreto de cálcio são um sistema tampão que funciona mantendo o pH e a osmolaridade.

Enquanto o tioglicolato de sódio atua como um agente redutor e, no caso de conter agar, fornece uma consistência semi-sólida, para retardar a oxigenação do meio. Finalmente, o azul de metileno é um indicador de oxidação, ou seja, detecta a presença de oxigênio.

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O meio semi-sólido com indicador redox é ideal para o transporte de amostras em que se suspeita da presença de bactérias anaeróbicas.

Características do meio de transporte

O meio Stuart, como todos os meios de transporte, atende a certas características, incluindo:

-Mantém cepas microbianas viáveis ​​presentes sem se multiplicar.

-Não contém nutrientes; Seus compostos visam manter a amostra hidratada, em condições adequadas de pH e osmolaridade.

-Inibe a autolisação de alguns microorganismos delicados, como o Pneumococcus.

– Seu uso é temporário, não deve ser prolongado demais.

Preparação

Meio semi-sólido Stuart com indicador redox

Preparação caseira

Ingredientes

Glicerofosfato de sódio 10 gr

Tioglicolato de sódio 1,0 gr

0,1 g de cloreto de cálcio

Azul de metileno 0,002 gr

Ágar-ágar 3 gr

1 L de água destilada

Misture os componentes e aqueça até dissolver completamente. Despeje em tubos ou compressas especiais. Eles são introduzidos na autoclave e esterilizados a 121 ° C por 15 minutos. Deixe os tubos esfriarem na posição vertical (na forma de um bloco). Mantenha em temperatura ambiente.

Preparação com meio comercial

Pesar 14,1 g do meio em 1 litro de água destilada. Aqueça mexendo sempre até que esteja completamente dissolvido, ele pode ser fervido. O restante do procedimento, como já descrito.

O meio desidratado é de cor creme e o preparado deve ser azul em sua superfície. Isto é devido à presença de azul de metileno.

O pH do meio deve ser ajustado para 7,4 ± 0,2

Stuart líquido modificado médio (preparação caseira)

Ingredientes

Glicerofosfato de sódio 10 gr

Tioglicolato de sódio 1 gr

Cloreto de cálcio di-hidratado 0,1 gr

1000 ml de água destilada

Carrega os mesmos ingredientes que o semi-sólido, mas não carrega ágar nem azul de metileno. Neste caso, os componentes não aquecidos são misturados e 0,5 ml distribuídos em tubos de 16 x 125 mm com tampa de rosca.

É esterilizado em autoclave a 121 ° C por 10 minutos. Para a amostragem, os swabs de dacron devem ser usados ​​se a amostra for para PCR ou rayon, se for para cultura.

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Os tubos são armazenados à temperatura ambiente.

Usos

Comercialmente, existem dispositivos especiais de transporte de amostras chamados culturette; Este dispositivo é um tubo alongado e fino que traz uma zaragatoa para dentro e, no final, existe um segmento que contém o meio Stuart semi-sólido ou líquido.

O dispositivo abre e a amostra é coletada com o cotonete. É então inserido de volta no tubo até que a ponta do swab seja inserida no meio de transporte semi-sólido; alguns trazem uma esponja de poliuretano impregnada com o meio Stuart líquido, com o qual a amostra é preservada mantendo-se úmida.

Caso se suspeite da presença de microorganismos delicados, devem ser utilizados cotonetes com carbono na amostragem.

As amostras que podem ser colhidas com zaragatoas ou zaragatoas e transferidas neste meio são exsudatos faríngeos, zaragatoas retais e várias secreções, incluindo: vaginal, uretral, ferida, ocular, ótica e abscesso.

Durante a transferência da amostra no meio de transporte para o laboratório, evite sujeitar o meio a condições ambientais extremas (muito frio ou muito quente). Mudanças repentinas na pressão atmosférica também devem ser evitadas.

O tempo em que o meio é capaz de manter um microrganismo viável dependerá da tensão em questão. Por exemplo, para microrganismos do gênero Neisserias e Haemophilus, eles podem permanecer viáveis ​​por até 24 horas, mas cepas como Salmonella ou Shigella podem durar dias e até semanas.

Se for estimado que o processamento da amostra pode demorar mais de 4 dias, é preferível congelar a amostra a -70 ° C.

Identificação da amostra no meio de transporte

O meio de transporte preparado ou a cultura comercial devem ter uma etiqueta onde serão colocados os seguintes dados:

Nome e sobrenome do paciente: evite confusão de amostras.

Número de identificação: é conveniente realizar uma ordem no trabalho.

Fonte da amostragem: ajuda o bacteriologista a escolher o meio de cultura apropriado.

Tratamento médico: Às vezes é necessário para possíveis consultas.

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Data e hora da amostragem: é necessário para a aceitação ou rejeição da amostra de acordo com o tempo decorrido entre a amostragem e a recepção no laboratório.

Outras informações que seriam muito úteis para anexar são:

Diagnóstico presuntivo: orienta a adição de meios de cultura especiais de acordo com a suspeita diagnóstica.

Tratamento antibiótico: é útil anexar-se ao antibiograma.

Toda essa informação é vital para garantir o processamento adequado da amostra.

Controle de qualidade

Para avaliar o funcionamento do meio Stuart, podem ser inoculadas cepas conhecidas e mantidas a 25 ° C, como: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

Em todos os casos, espera-se recuperar o microrganismo em questão, preservado por 24 horas.

Por outro lado, outras cepas como Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Escherichia coli ATCC 11775 podem ser utilizadas.

Em todos os casos, espera-se uma recuperação abundante por até 96 horas.

Limitações

Alguns estudos garantem que o glicerofosfato presente no meio Stuart possa ser metabolizado por alguns coliformes, entre outras bactérias Gram-negativas e, portanto, se multiplique nesse meio.

Esse risco aumenta quanto mais tempo o processamento da amostra é atrasado. Da mesma forma, a exposição do meio Stuart a temperaturas elevadas durante sua transferência influencia esse particular.

Referências

  1. “Meios de transporte (microbiologia).” Wikipedia, A enciclopédia livre . 13 Abr 2018, 10:36 UTC. 1 de abril de 2019. Disponível em: en.wikipedia.org
  2. Laboratórios Microkit: Meios de Cultura. Transporte de Stuart. Disponível em: Disponível em: mediacultivo.com
  3. LabLisan Stuart meios de transporte. Disponível em: lablinsan.cl
  4. MDM Scientific. As vantagens de ter Stuart como meio de transporte microbiológico. Disponível em: mdmcientifica.com
  5. Metrix Laboratories Stuart. 2017. Disponível em: metrixlab.mx
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

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